Jedynym językiem urzędowym w Republice Czeskiej jest język czeski, który podobnie jak słowacki, polski, serbski, rosyjski, chorwacki czy bułgarski należy do języków słowiańskich. Charakterystyczne dla języka czeskiego jest częste stosowanie tak zwanych znaków diakrytycznych (czyli haczyków nad niektórymi literami) oraz kresek (oznaczających długość samogłosek), które często zmieniają znaczenie całych słów. Językiem czeskim posługuje się około 96 % mieszkańców, często można usłyszeć także język słowacki, polski lub romski. Porozumieć się można zazwyczaj po angielsku, niemiecku i rosyjsku.
Niesłyszący łatwiej porozumieją się, jeśli używają włoskiego lub austriackiego języka migowego, które są w pewnym stopniu zbliżone do czeskiego języka migowego. Z kolei amerykański i azjatyckie języki migowe bardzo różnią się od czeskiego języka migowego.